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        CCK8試劑盒日本同仁的檢測步驟

        更新時間:2018-01-17  |  點擊率:2232
           CCK8試劑盒日本同仁利用了同仁化學研究所(Dojindo)開發(fā)的四唑鹽——WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽),它在電子載體1-Methoxy PMS存在的情況下能夠被還原成水溶性的甲臜染料。CCK-8溶液可以直接加入到細胞樣品中;不需要預(yù)配各種成分。CCK-8法是用于測定細胞增殖或細胞毒性試驗中活細胞數(shù)目的一種高靈敏度,無放射性的比色檢測法。CCK-8被細胞內(nèi)脫氫酶生物還原后生成的橙色甲臜染料能夠溶解在組織培養(yǎng)基中,生成的甲臜量與活細胞數(shù)量成正比。WST-8法檢測細胞增殖、細胞毒性實驗的靈敏度比其它四唑鹽如MTT, XTT, MTS或WST-1高。由于CCK-8溶液相當穩(wěn)定,并且對細胞沒有毒性,因此可以長時間孵育。

          CCK8試劑盒日本同仁檢測步驟

          1. 向各孔中加入100 μl細胞懸液。a)

          2. 在37℃下預(yù)孵育培養(yǎng)板。b)

          3. 向各孔中加入各濃度的待測溶液c)10 μl。

          4. 37℃下孵育。

          5. 向各孔中加入10 μl的CCK-8溶液d)。

          6. 37℃下孵育1-4小時。e)

          7. 測定450 nm處的OD值。

          a) 使用適當?shù)呐囵B(yǎng)基制備50,000-100,000個/ml的細胞懸液。

          b) 建議使用CO2培養(yǎng)箱guo夜預(yù)培養(yǎng)。

          c) 使用培養(yǎng)基或PBS來制備溶液。

          d) 如果待測溶液有還原性,測定不含細胞,但含有CCK-8的待測溶液在450 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小,則可以直接加入CCK-8 ,如果吸光度相對較大,則需要除去培養(yǎng)基,并用培養(yǎng)基洗滌細胞兩次,然后加入新的100 μl培養(yǎng)基和10 μl CCK-8進行檢測。

          e) 白細胞可能需要培養(yǎng)較長時間。